细胞系与细胞株的定义及建立要求

一、概念

1. 细胞系（Cell Line）：细胞系是指从原代培养物中成功传代后形成的细胞群体，由原代培养物中存在的细胞世系（Lineage of Cells）组成。
2. 细胞株（Cell Strain）：细胞株是通过选择或克隆等方法从原代培养物或细胞系中获得的，具备特定特性或标志物的细胞群体。这些特性或标志必须在整个培养期间始终存在。如果无法持续传代或传代次数有限，则称为有限细胞株（finite cell strain）；若可以连续传代，则称为连续细胞株（continuous cell strain）。对人类肿瘤细胞而言，在体外培养六个月以上，且生长状态稳定并能够连续传代的细胞可称为连续性株或系。

二、建立细胞系的要求

细胞能否被认可为鉴定的细胞系，视具体情况而定，尚无统一规定。对于原代培养用细胞而言，只需供体均匀，取材部位及组织类型稳定即可。而对于长时间培养，特别是反复传代的细胞，须提供以下信息：
1. 组织来源：包括细胞供体的物种（如人类或动物）、性别、年龄及取材的器官或组织。例如，若为肿瘤组织，应提供临床和病理诊断，以及病历号等信息。
2. 细胞生物学检测：需了解细胞的一般及特殊生物学特性，如细胞形态、特异结构、生长曲线、分裂指数和倍增时间等。若为肿瘤细胞，为证实来源于原肿瘤组织并保持恶性，需进行软琼脂培养、异体接种致瘤及对正常组织的侵润力实验。
3. 培养条件和方法：需说明细胞系适应的环境，包括使用的培养基、血清种类和用量，以及适宜的pH值。

三、细胞建株的关键要点与基本过程

（一）肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：取材多来源于外科手术或活检的肿瘤组织，需避免使用坏死组织，选择瘤细胞集中且活力较好的部位，如瘤性转移淋巴结或胸腹水。取材后需尽快培养，若无法立即培养可考虑冻存，其培养及冻存方法同正常组织。
2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织往往混有成纤维细胞，其会与瘤细胞共同生长，抑制癌细胞生长。可通过机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法和胶原酶消化法等进行排除。
3. 提高肿瘤细胞培养存活率和生长率：肿瘤细胞在体外培养难度较大，因此建立传代的肿瘤细胞系更为挑战。需采用适宜底物（如鼠尾胶原）和细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松或雌激素），甚至可考虑使用动物媒介培养。

（二）人类淋巴母细胞建株的方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，并混合2ml RPMI 1640培养基。
2. 将混合液缓慢沿管壁加入预置有4ml淋巴细胞分离液的管中，静置30分钟。
3. 以1500 rpm离心15分钟，取出白细胞层（第二层）至另一离心管中。
4. 使用RPMI 1640清洗白细胞两次，每次5ml。
5. 将白细胞接种于1ml RPMI 1640培养基中，添加10μl环胞霉素和100μl EBV（EB病毒）液，混匀后摇床振荡，条件为40次/分，37℃持续3小时。
6. 进行离心，将细胞接种至1ml培养基中（含1mM/ml谷氨酰胺），再次添加10μl环胞霉素，轻轻混匀并在37℃培养。
7. 五天后观察细胞转化和生长情况，视情况决定是否进行半量换液。通常进行1至2次半量换液并保持环胞霉素浓度。
8. 一旦转化细胞数量显著提升并形成细胞团块，可转入25ml细胞培养瓶中，加1至2ml培养基，在37℃下培养10至15天。一般每3至4天观察一次，以决定是否换液和传代。
9. 当细胞生长达到一定数量后，需进行冻存，冻结之前还需进行核型分析及存档。

通过以上步骤和要求，能够有效建立并维持细胞系和细胞株，促进生物医疗研究的发展，正如尊龙凯时所秉持的科学精神与创新价值，助力医学前沿。